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《实用免疫细胞与核酸》

• 前言
• 第一章　总论
  • 第一节　有关的免疫学理论（缺）
  • 第二节　免疫细胞化学的有关技术概述
    • 一、抗体的制备和配制
    • 二、组织材料的处理
    • 三、免疫染色
    • 四、对照
    • 五、免疫细胞化学结果的判断
  • 第三节　有关细胞和组织学技术
    • 一、细胞和组织
    • 二、细胞和组织的固定
    • 三、组织切片技术
  • 参考文献
• 第二章　抗原和抗体的制备
  • 第一节　抗原的制备（缺）
  • 第二节　抗体的制备
    • 一、抗血清的制备
    • 二、单克隆抗体的制备
      • （一）动物的选择与免疫
      • （二）细胞融合
      • （三）选择杂交瘤细胞及抗体检测
      • （四）杂交瘤的克隆化
      • （五）杂交瘤细胞的冻存与复苏
      • （六）单克隆抗体的大量生产
      • （七）单克隆抗体的鉴定
  • 第三节　抗体的提取与纯化（缺）
• 第三章　免疫荧光细胞化学技术
  • 第一节　免疫荧光细胞化学的原理
    • 一、直接法
    • 二、间接法
    • 三、补体法
    • 四、双重免疫荧光标记法
    • 五、对照试验
  • 第二节　荧光抗体的制备
    • 一、荧光素
      • （一）异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate, GITC）
      • （二）四乙基罗达明（tetraethylrodamineB200, RB200）
      • （三）四甲基异硫氰酸罗达明（tetramethylrhodamineisothiocyanate, TMRITC）
    • 二、荧光素标记抗体的方法
      • （一）FITC标记抗体的方法
      • （二）四乙基罗达明标记抗体方法
      • （三）四甲基异硫氰酸罗达明标记抗体方法
      • （四）藻红蛋白标记抗体的方法
      • （五）PE-标记蛋白A方法
      • （六）蓝色荧光素标记抗体方法
    • 三、荧光抗体质量控制
      • （一）染色特异性和敏感性的测定
      • （二）F/P比值的测定
    • 四、荧光抗体的保存
  • 第三节　免疫荧光细胞化学染色方法
    • 一、标本制作
    • 二、荧光抗体染色方法
      • （一）直接法
      • （二）间接法
      • （三）补体法
      • （四）膜抗原荧光抗体染色法
      • （五）双重染色法
      • （六）荧光抗体再染色法
    • 三、荧光抗原染色法
  • 第四节　荧光显微镜检查法
    • 一、荧光显微镜
      • （一）光源
      • （二）滤色系统
      • （三）反光镜
      • （四）聚光镜
      • （五）物镜
      • （六）目镜
      • （七）落射光装置
    • 二、荧光显微镜标本制作要求
    • 三、使用荧光显微镜的注意事项
    • 四、荧光图像的记录方法
  • 第五节　非特异性染色的消除方法
    • 一、非特异性染色的主要因素
    • 二、消除非特异性染色的方法
      • （一）动物脏器粉末吸收法
      • （二）透析法
      • （三）葡聚糖凝胶G-50柱层析法
      • （四）DEAE纤维素柱层析法
      • （五）荧光抗体稀释法
      • （六）纯化抗原法
      • （七）纯化抗体法---免疫吸收法
      • （八）伊文氏蓝（Evans blue）衬染法
  • 参考文献
• 第四章　免疫酶细胞化学
  • 第一节　固定和切片
    • 一、固定
    • 二、切片
  • 第二节　染色方法
    • 一、本科标抗体法
      • （一）酶的种类及特点
      • （二）本科标抗体的制备（Boosma,DM, 1983）
      • （三）酶标抗体的纯化
      • （四）染色原理及步骤
    • 二、非标记抗体酶法
      • （一）酶桥法
      • （二）PAP法
  • 第三节　结果分析
    • 一、对照实验
    • 二、假阳性及其处理
    • 三、抗体有关事项
    • 四、单克隆抗体
    • 五、增加染色强度方法
  • 第四节　ICC的几种特殊应用
    • 一、ICC在铺片中应用
    • 二、ICC的双重染色法
      • （一）切片
      • （二）染色
    • 三、ICC在细胞功能研究中的应用
    • 四、 ICC在原位杂交技术中的应用
  • 参考文献
• 第五章　免疫金银及铁标记技术
  • 第一节　免疫金技术发展史
  • 第二节　溶胶的基本概念
    • 一、胶体金
    • 二、胶体金的一般性状
  • 第三节　胶体金的制备方法
    • 一、制备胶体金的准备
    • 二、制备胶体金的方法和步骤
      • （一）白磷还原法
      • （二）抗体血酸还原法（Stathis and Fabrikanos 1958）
      • （三）柠檬酸三钠还原法（Frens 1973）
      • （四）鞣酸—柠檬酸三钠还原法（Slot与Gueeze1985年）
      • （五）乙醇超声波还原法（Baigent and Muller 1980）
      • （六）硼氢化钠还原法（Tschopp et al 1982）
      • （七）放射性胶体金的制备方法（Kent and Allen 1981）
  • 第四节　胶体金的质量鉴定
    • 一、胶体金颗粒直径测定
    • 二、胶体金金颗粒均匀度测定
    • 三、影响胶体金颗粒大小的因素
  • 第五节　胶体金标记物的制备
    • 一、待标记蛋白质的准备
    • 二、胶体金pH值的调整
    • 三、待标记蛋白质最适稳定量的测定
    • 四、蛋白质的胶体金标记
    • 五、胶体金标记蛋白质的纯化
      • （一）调整与超速离心法
      • （二）凝胶过滤法
    • 六、免疫金探针的鉴定
  • 第六节　免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
    • 一、固定剂的选择及固定时间（详见表5-9）
    • 二、切片的处理与粘附。
  • 第七节　光镜免疫金银细胞化学方法
    • 一、免疫金染色
      • （一）免疫金法（IGS）
      • （二）蛋白A-金（PAG）放大法
    • 二、免疫金银法
      • （一）石蜡切片的IGSS染色
      • （二）冰冻切片的IGSS染色
      • （三）半薄切片的IGSS染色
    • 三、彩色免疫金银法（CIGSS）
    • 四、免疫金及免疫金银技术的优点
    • 五、在IGSS染色中常见技术问题和对策
    • 六、物理显影液及缓冲液的配制
  • 第八节　免疫胶体铁细胞化学
    • 一、胶体铁的制备方法
    • 二、抗体的标记和纯化
    • 三、胶体铁标记抗体的鉴定
    • 四、免疫胶体铁细胞化学染色
    • 五、方法的应用
  • 参考文献
• 第六章　亲合组织化学技术及免疫细胞化学技术的某些进展
  • 第一节　抗生物素—生物素免疫细胞化学染色法
    • 一、基本原理
    • 二、几中抗生物素—生物素染色法
      • 1．抗生物素—生物素—过氧化酶复合物技术（Avidin Biotin–Peroxidase Complex technique, 简称ABC技术）
      • 2．桥抗生物素—生物素技术（Bridged Avidin –Biotin technique, 简称BRAB技术）
      • 3．标记生物素—抗生物素技术（Labelled Avidin—Biotin technique, LAB技术）
  • 第二节　葡萄球菌蛋白A（SPA）
    • 一、SPA的性质
    • 二、SPA的应用
    • 三、SPA在免疫细胞化学染色中的应用
  • 第三节　凝集素
    • 一、凝集素的特性
    • 二、凝集素的应用
    • 三、凝集素在免疫细胞化学中的应用
    • 四、HRP标记凝集素及凝集素抗体的制备
  • 第四节　免疫细胞化学技术的某些新进展
  • 参考文献
• 第七章　电子显微镜免疫细胞化学技术
  • 第一节　电子显微镜免疫细胞化学技术概述
    • 一、组织固定与取材
    • 二、免疫染色
    • 三、包埋
    • 四、对照试验
  • 第二节　免疫铁蛋白技术
    • 一、基本原理
    • 二、铁蛋白的提取和纯化
    • 三、铁蛋白与免疫球蛋白的结合
    • 四、电镜标本的制备方法
  • 第三节　免疫酶细胞化学技术
    • 一、基本原理
    • 二、电镜标本制备方法
      • 1．单层细胞培养物免疫酶染色法
      • 2．组织切片酶标记抗体染色法
      • 3．PAP包埋前染色法（Pickel 等，1975）
      • 4．PAP包埋后染色法（Ordronneau, 1982）
      • 5．PAP免疫电镜双重标记
  • 第四节　免疫电镜胶体金标记法
    • 一、电镜水平的免疫金染色法
      • 1．包埋后染色
      • 2．包埋前染色
    • 二、胶体金标记蛋白A技术（Protein A-goldtechnique, PAg法）
      • 1．蛋白A—金（PAg）复合物的制备（Slot 和Geuze,1981）
      • 2．
    • 三、胶体金双标记技术（常用为蛋白A—胶体金）
    • 四、免疫电镜金—银法染色技术
  • 第五节　其它免疫电镜技术
    • 一、凝集素电镜标记技术
    • 二、扫描免疫电镜技术
      • （一）标记物
      • （二）免疫标记方法
      • （三）扫描免疫电镜的具体操作步骤
    • 三、冷冻蚀刻免疫电镜技术
      • 1．冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术
      • 2．断裂—标记免疫电镜技术
  • 参考文献
• 第八章　蛋白质与多肽激素的放射免疫分析
  • 第一节　概述
    • 一、放射免疫分析的优缺点
    • 二、基本原理
  • 第二节　放射性碘标记
    • 一、同位素的选择
    • 二、蛋白质与多肽激素的放射性碘标记
      • （一）氯胺T法
      • （二）乳过氧化物酶法（LPO）
      • （三）Iodogen碘化法
      • （四）酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法
    • 三、放射性标记化合物的纯化与鉴定
      • （一）纯化标记化合物的常用方法
      • （二）标记化合物的主要质量指标
  • 第三节　结合和游离部分的分离
    • 一、对分离方法的要求
    • 二、常用的分离方法
  • 第四节　样品的前处理
    • 一、脑、脊髓与垂体中神经肽的提取（以大鼠为例）
    • 二、大鼠脑神经核团微穿孔取样方法（以下丘脑为例）
    • 三、内脏、肿瘤组织中神经肽的提取（以胃粘膜为例）
    • 四、血浆
    • 五、脑脊液
    • 六、尿
    • 七、胃液
  • 第五节　放射免疫分析法的建立
    • 一、放射免疫分析的基本试剂
    • 二、加样程序
    • 三、放射免疫分析的质量控制
  • 参考文献
• 第九章　免疫细胞化学与图像分析
• 第十章　流式细胞术（FCM）在免疫细胞化学中的应用
  • 第一节　流式细胞术简介
    • 一、流式细胞术发展简史
    • 二、流式细胞计的基本结构和工作原理
  • 第二节　FCM在生物医学工程学方面的应用
    • 一、FCM应用的技术途径
    • 二、FCM的典型应用简介
  • 第三节　FCM对外周白细胞的免疫荧光分析
    • 一、白细胞的免疫荧光标记技术
    • 二、白细胞免疫荧光分析的数据分析
    • 三、淋巴细胞亚群的测定及其在临床医学中的实用意义
  • 参考文献
• 第十一章　免疫细胞化学在神经科学中的应用